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HPLC流動相制備提示與技巧

更新時間:2022-11-30點擊次數:1412

HPLC中使用的流動相直接影響樣品中組分的保留和差異遷移,從而對樣品的分離產生深遠的影響。因此,正確且盡可能一致地進行流動相制備至關重要。以下是流動相制備的一些提示和技巧,可確保分離和分析的*高準確度。


使用簡單的流動相

使用簡單的流動相將獲得更穩(wěn)定、更易于轉移的方法。這些方法使組織受益,因為當實施可靠的方法時,故障排除和停機時間將降至最·低


使用適當等級的溶劑和試劑

構成流動相的組分必須具有最高純度,這一點至關重要。對于溶劑,應根據應用使用正確的牌號。當涉及到試劑時,它們必須具有高純度并且不超過有效期。


基于重量的流動相制備基礎

雖然流動相制備可以基于體積比,但體積會隨著溫度的變化而變化,這會影響分離的準確性和重現(xiàn)性。因此,流動相制備最好基于重量比,即使環(huán)境條件發(fā)生變化,重量比也能保持一致。


分別混合流動相組分

如果根據體積進行流動相制備,則重要的是分別測量流動相的組分,然后將它們合并。如果先測量水,并將有機溶劑加入到水中,溶劑混合物的收縮會增加其濃度。如果將水添加到溶劑混合物中,溶劑混合物的收縮將降低其濃度。


使用預混流動相

混合流動相的替代方法是使用預混流動相。這在反相色譜中特別有用,因為它有助于避免混合過程中的溫度變化,提高混合效率,并使混合物更有效地脫氣。


校正溶劑的溫度

當依賴體積時,溶劑必須達到室溫,以確保體積一致和分析的重現(xiàn)性。這應該通過將溶劑放入熱水或冷水浴中來完成,以適當調節(jié)溶劑溫度所需的為準。


選擇正確的過濾器

在制備過程中過濾流動相時,選擇正確的濾光片類型非常重要。對于HPLC系統(tǒng),建議使用孔徑為0.45μm或更小的膜式過濾器。對于UPLC系統(tǒng),孔徑應為0.22 μm或更小。這樣可以有效地去除流動相中的顆粒,防止系統(tǒng)堵塞。


最終,您希望流動相制備不僅正確,而且一致。這將確保分析的重現(xiàn)性,并保護您運行的分離的完整性。

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